服务简介

实时定量荧光PCR(Real-time PCR)的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即实时荧光定量核酸扩增检测系统,也叫实时定量基因扩增荧光检测系统,简称QPCR。该方法检测细胞、组织或微生物中基因表达变化,与常规PCR相比,实时荧光定量PCR具有极高的灵敏度、高度的重复性和极佳的特异性,且后续处理无EB等有害物质的污染,已成为现阶段国际公认的核酸分子定量检测的金标准,在基因表达研究和临床疾病检测等领域已得到广泛应用。

服务内容

1. 根据客户提供基因序列设计定量引物
2. 提取样品总RNA,并反转录成cDNA
3. Real-Time PCR,进行实验结果分析

原理

实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)/QRT-PCR,是在PCR反应体系中加入荧光标记物,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过扩增曲线对未知模板进行定量分析的方法。

荧光定量PCR所使用的荧光基团可分为两种:荧光探针和荧光染料。

在PCR反应体系中加入过量SYBR荧光染料,掺入DNA双链后发射一定量的荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

Taqman探针,利用探针与模板的特异性结合的特点,以及探针内荧光报告基团和淬灭基团的分子特性来实现对PCR进行定量检测。这种方法可以实现高灵敏度,严格针对特定碱基序列的定量实验。

应用领域

临床疾病诊断、动物疾病检测、食品安全、科学研究、应用行业

技术优势

1.对DNA模板没有选择性

2.操作简单

3.结果精确

4.灵敏度较高

实验路线

qpcr-process

实验仪器

qpcr96

96孔板

qpcr384

384孔板

送样要求

样品类型送样要求
样品类型细胞样本保证细胞个数在1×10^6~1×10^7质检。干冰运输。
细胞样本纯度OD260/280 比值为 1.8-2.0,浓度≥20 ng/μl,体积≥20μl,干冰运输
RNA样本样品为EDTA抗凝或枸椽酸钠抗凝,样品量大于0.5 ml,样品采集后于-20°C或-80°C保存,低温(≤-4°C)运输
血液样本样品可以为新鲜组织(最好-80°C保存)或石蜡包埋的组织,也可以是95%乙醇中固定的组织,组织量大于100 mg。干冰运输。

结果报告展示

amplification-plot

Amplification Plot

melt-curve

Melt Curve

参考文献

[1] Weber D C, Lundgren J G. Detection of predation using qPCR: effect of prey quantity, elapsed time, chaser diet, and sample preservation on detectable quantity of prey DNA. Journal of Insect Science, 2009, 9(1): 41.

[2] Walker D G, Whetzel A M, Serrano G, et al. Association of CD33 polymorphism rs3865444 with Alzheimer’s disease pathology and CD33 expression in human cerebral cortex. Neurobiology of Aging, 2015, 36(2): 571-582.

[3] Kozmus C E P, Potočnik U. Reference genes for real-time qPCR in leukocytes from asthmatic patients before and after anti-asthma treatment. Gene, 2015, 570(1): 71-77.

De Spiegelaere W, Dern-Wieloch J, Weigel R, et al. Reference gene validation for RT-qPCR, a note on different available software packages. PloS one, 2015, 10(3): e0122515.

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服务简介

实时定量荧光PCR(Real-time PCR)的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即实时荧光定量核酸扩增检测系统,也叫实时定量基因扩增荧光检测系统,简称QPCR。该方法检测细胞、组织或微生物中基因表达变化,与常规PCR相比,实时荧光定量PCR具有极高的灵敏度、高度的重复性和极佳的特异性,且后续处理无EB等有害物质的污染,已成为现阶段国际公认的核酸分子定量检测的金标准,在基因表达研究和临床疾病检测等领域已得到广泛应用。

服务内容

1. 根据客户提供基因序列设计定量引物
2. 提取样品总RNA,并反转录成cDNA
3. Real-Time PCR,进行实验结果分析

原理

实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)/QRT-PCR,是在PCR反应体系中加入荧光标记物,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过扩增曲线对未知模板进行定量分析的方法。

荧光定量PCR所使用的荧光基团可分为两种:荧光探针和荧光染料。

在PCR反应体系中加入过量SYBR荧光染料,掺入DNA双链后发射一定量的荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

Taqman探针,利用探针与模板的特异性结合的特点,以及探针内荧光报告基团和淬灭基团的分子特性来实现对PCR进行定量检测。这种方法可以实现高灵敏度,严格针对特定碱基序列的定量实验。

应用领域

临床疾病诊断、动物疾病检测、食品安全、科学研究、应用行业

技术优势

1.对DNA模板没有选择性

2.操作简单

3.结果精确

4.灵敏度较高

+ 技术参数

实验路线

qpcr-process

实验仪器

qpcr96

96孔板

qpcr384

384孔板

送样要求

样品类型送样要求
样品类型细胞样本保证细胞个数在1×10^6~1×10^7质检。干冰运输。
细胞样本纯度OD260/280 比值为 1.8-2.0,浓度≥20 ng/μl,体积≥20μl,干冰运输
RNA样本样品为EDTA抗凝或枸椽酸钠抗凝,样品量大于0.5 ml,样品采集后于-20°C或-80°C保存,低温(≤-4°C)运输
血液样本样品可以为新鲜组织(最好-80°C保存)或石蜡包埋的组织,也可以是95%乙醇中固定的组织,组织量大于100 mg。干冰运输。

结果报告展示

amplification-plot

Amplification Plot

melt-curve

Melt Curve

+ 文献及案例

参考文献

[1] Weber D C, Lundgren J G. Detection of predation using qPCR: effect of prey quantity, elapsed time, chaser diet, and sample preservation on detectable quantity of prey DNA. Journal of Insect Science, 2009, 9(1): 41.

[2] Walker D G, Whetzel A M, Serrano G, et al. Association of CD33 polymorphism rs3865444 with Alzheimer’s disease pathology and CD33 expression in human cerebral cortex. Neurobiology of Aging, 2015, 36(2): 571-582.

[3] Kozmus C E P, Potočnik U. Reference genes for real-time qPCR in leukocytes from asthmatic patients before and after anti-asthma treatment. Gene, 2015, 570(1): 71-77.

De Spiegelaere W, Dern-Wieloch J, Weigel R, et al. Reference gene validation for RT-qPCR, a note on different available software packages. PloS one, 2015, 10(3): e0122515.

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