TMT/iTRAQ

TMT/iTRAQ是一种可以与多肽样品快速的、无偏倚和灵敏地发生反应的标签试剂,与最先进质谱分析技术的结合,可以实现了更精准、 高通量的定量蛋白质组学。

分类: 标签:

描述

  • 原理
    标签试剂由三部分组成:报告基团、质量平衡基团和肽反应标记试剂基团,形成4种-10种相对分子质量均等量的异位标签。

标签试剂是可与氨基酸末端氨基及赖氨酸侧链氨基连接的胺标记同重元素。在质谱图中,任何一种试剂标记不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比。 在串联质谱中,信号离子表现为不同质荷比的峰,因此根据波峰的高度及面积,可以鉴定出蛋白质和分析出同一蛋白质不同处理的定量信息。

 


Functional regions of the TMT reagent’s chemical structure

图1. TMT试剂化学结构的功能区,包含MS/MS中HCD和ETD的碎裂点。

TMTPro workflow
TMT reagents data analysis and quantitation

图3. 使用 TMTpro 同质异序标签试剂进行 MS 实验的步骤总结分离自细胞或组织的蛋白质提取物被还原、烷基化,然后使用 EasyPep™Mini MS 样品制备试剂盒或等效方法消化。然后在样品混合、分馏和净化之前,用 TMTpro 试剂标记样品。在数据分析之前,在高分辨 Orbitrap LC-MS/MS 质谱仪上分析标记样品,以识别肽段并定量分析报告离子的相对丰度。


应用领域
疾病标志物筛选、疾病控制机制、药物作用靶点研究、发育机制研究、产量提高、作用机制研究、植物抗逆、营养吸收机制研究、稀有物种研究、特殊功能蛋白质筛选
技术优势

  1. 可同时对4-10种不同条件样品进行蛋白质差异分析
  2. 分离能力强、分析范围广,定性分析结果可靠;
  3. MS具备高灵敏度、检测限低;
  4. 自动化程度高、分析时间快,分离效果好;
  5. 适合广泛样品类型:胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等;
  6. 与凝胶分离的蛋白质定量技术相比,标记质谱定量技术可检测到更多类型的蛋白质分子,如低丰度蛋白质、强酸(碱)性蛋白质、<10KD或>100KD的蛋白质分子。