服务简介

分子量是有机化合物最基本的理化性质参数,正确与否往往代表着所测定的生物大分子的结构是否正确。MALDI-TOF-MS(基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱, 英文名Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time of Flight Mass Spectrometry)是近年来发展起来的一种新型的软电离生物质谱。该方法不产生或产生较少的碎片离子。它可直接应用于混合物的分析,也可用来检测样品中是否含有杂质及杂质的分子量。

分子量也是生物大分子如多肽、蛋白质等鉴定中首要的参数,也是基因工程产品报批的重要数据之一。MALDI-TOF的准确度达0.1%~0.01%(经验值),高于目前常规应用的SDS电泳与高效凝胶色谱技术,是目前表征分析中不可或缺的一门技术。

案例

利拉鲁肽分子量测定

参数:

模式:Reflector positive ms                    质量扫描范围:800~4000Da

激光强度:4500                                      激光打点数量:1200 laser shots

质量误差:100ppm

测试结果:

利拉鲁肽样品(未酶切)

理论分子量[M+H]+:3749.95Da

maldi-tof

服务简介

二硫键是蛋白质形成特定空间结构的重要化学键,在一条肽链上不同位置上的氨基酸之间形成二硫键,可以将肽链折叠成特定的空间结构。一个蛋白质分子可以由多个亚基组成,亚基之间也可通过二硫键相连,形成特定空间结构。二硫键与蛋白质高级结构的生物活性,复性都有关。故作为一种特殊的修饰,对其进行正确的鉴定对于生物药结构确证来说是至关重要的一部。

案例

rhNGF(重组人神经生长因子)二硫键分析

分析流程

disulfide-bonds-process

理论信息

Trypsin酶切后理论酶切肽段

Num  From-To     MH+     HPLC     pI           Sequence

1       1-  9         1067.54  16.56    10.85     SSSHPIFHR

2      10- 25       1712.77   22.01    3.74      GEFSVCDSVSVWVGDK

3      26- 32       749.40     8.23      6.50      TTATDIK

4      33- 34       204.13    1.40      10.15     GK

5      35- 50    1791.93    17.75   4.31      EVMVLGEVNINNSVFK

6      51- 57    962.46      17.97   6.67      QYFFETK

7      58- 59    277.12      8.41     9.55      CR

8      60- 69    1058.44    11.96   3.92      DPNPVDSGCR

9      70- 74    519.28      8.22     6.99      GIDSK

10     75- 88    1723.78    21.14    8.69     HWNSYCTTTHTFVK

11     89- 95     735.37     11.07    6.99     ALTMDGK

12     96-100    631.33     12.84   10.80   QAAWR

13     101-103   435.27    14.49    10.85   FIR

14    104-114    1177.57   21.53    5.95    IDTACVCVLSR

15    115-115    147.11     1.09      9.47    K

16    116-117    189.12     2.24      6.97    AV

二硫键理论配对信息

Cys15与Cys80配对

Cys58与Cys108配对

Cys68与Cys110配对

检测C-C

1.证明 C15-C80存在

2.证明 C58-C108和C68-C110存在

经计算二硫键肽段理论分子量与Trypsin理论酶切肽段分子量无相近及干扰。

结果

检测到C-C连接肽段1

disulfide-bonds-result1
disulfide-bonds-result2

图中可见1718.27(2+)

1719.27(2+)二级图谱

disulfide-bonds-result3
disulfide-bonds-result4

图中可见1145.85(3+)

1146.52(3+)二级图谱

检测到C-C连接肽段2

disulfide-bonds-result5
disulfide-bonds-result6

图中可见1256.06(2+)

1256.56(3+)二级图谱

disulfide-bonds-result7
disulfide-bonds-result8

图中可见837.71(3+)

838.04(3+)二级图谱

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+ MALDI-TOF分子量测定分析

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分子量是有机化合物最基本的理化性质参数,正确与否往往代表着所测定的生物大分子的结构是否正确。MALDI-TOF-MS(基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱, 英文名Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time of Flight Mass Spectrometry)是近年来发展起来的一种新型的软电离生物质谱。该方法不产生或产生较少的碎片离子。它可直接应用于混合物的分析,也可用来检测样品中是否含有杂质及杂质的分子量。

分子量也是生物大分子如多肽、蛋白质等鉴定中首要的参数,也是基因工程产品报批的重要数据之一。MALDI-TOF的准确度达0.1%~0.01%(经验值),高于目前常规应用的SDS电泳与高效凝胶色谱技术,是目前表征分析中不可或缺的一门技术。

案例

利拉鲁肽分子量测定

参数:

模式:Reflector positive ms                    质量扫描范围:800~4000Da

激光强度:4500                                      激光打点数量:1200 laser shots

质量误差:100ppm

测试结果:

利拉鲁肽样品(未酶切)

理论分子量[M+H]+:3749.95Da

maldi-tof
+ 二硫键分析

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二硫键是蛋白质形成特定空间结构的重要化学键,在一条肽链上不同位置上的氨基酸之间形成二硫键,可以将肽链折叠成特定的空间结构。一个蛋白质分子可以由多个亚基组成,亚基之间也可通过二硫键相连,形成特定空间结构。二硫键与蛋白质高级结构的生物活性,复性都有关。故作为一种特殊的修饰,对其进行正确的鉴定对于生物药结构确证来说是至关重要的一部。

案例

rhNGF(重组人神经生长因子)二硫键分析

分析流程

disulfide-bonds-process

理论信息

Trypsin酶切后理论酶切肽段

Num  From-To     MH+     HPLC     pI           Sequence

1       1-  9         1067.54  16.56    10.85     SSSHPIFHR

2      10- 25       1712.77   22.01    3.74      GEFSVCDSVSVWVGDK

3      26- 32       749.40     8.23      6.50      TTATDIK

4      33- 34       204.13    1.40      10.15     GK

5      35- 50    1791.93    17.75   4.31      EVMVLGEVNINNSVFK

6      51- 57    962.46      17.97   6.67      QYFFETK

7      58- 59    277.12      8.41     9.55      CR

8      60- 69    1058.44    11.96   3.92      DPNPVDSGCR

9      70- 74    519.28      8.22     6.99      GIDSK

10     75- 88    1723.78    21.14    8.69     HWNSYCTTTHTFVK

11     89- 95     735.37     11.07    6.99     ALTMDGK

12     96-100    631.33     12.84   10.80   QAAWR

13     101-103   435.27    14.49    10.85   FIR

14    104-114    1177.57   21.53    5.95    IDTACVCVLSR

15    115-115    147.11     1.09      9.47    K

16    116-117    189.12     2.24      6.97    AV

二硫键理论配对信息

Cys15与Cys80配对

Cys58与Cys108配对

Cys68与Cys110配对

检测C-C

1.证明 C15-C80存在

2.证明 C58-C108和C68-C110存在

经计算二硫键肽段理论分子量与Trypsin理论酶切肽段分子量无相近及干扰。

结果

检测到C-C连接肽段1

disulfide-bonds-result1
disulfide-bonds-result2

图中可见1718.27(2+)

1719.27(2+)二级图谱

disulfide-bonds-result3
disulfide-bonds-result4

图中可见1145.85(3+)

1146.52(3+)二级图谱

检测到C-C连接肽段2

disulfide-bonds-result5
disulfide-bonds-result6

图中可见1256.06(2+)

1256.56(3+)二级图谱

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图中可见837.71(3+)

838.04(3+)二级图谱

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