产品编号 MP0601-10

产品介绍

微生物群落广泛的分布于地球的每一个生态系统，其在物质代谢、循环过程中发挥重要作用。然而由于该类样品的复杂性及多样性，常规的方法难以有效的从样品中提取蛋白。北京邦菲生物科技有限公司生产的宏蛋白质组总蛋白提取试剂盒为各种环境样品中总蛋白的提取提供有效的解决方案。本试剂盒适用于各种类型活性污泥、粪便、水体样品、发酵食品等蛋白的提取。分离得到的蛋白可应用于Western blot，SDS-PAGE，2D电泳，蛋白质组等实验。本试剂盒可提取2 – 20 g样品。

土壤样品推荐使用北京邦菲生物科技有限公司生产的宏蛋白质提取试剂盒（土壤）（MP0602-10 或MP0602-05）。

试剂盒组成

未提供的设备及材料

1. 涡旋混合仪

2. 移液枪

3. 冷冻离心机

4. 液氮

5. 研钵

6. 试剂：甲醇、丙酮

注意事项

1. 本试剂盒有效期为12个月，请严格按照说明书提示保存试剂。

2. 所有试剂使用前均需预冷，所有操作尽量在冰上或4℃进行，以保持蛋白质的完整性和活性，防止蛋白降解。

3. 本产品的试剂在低温储存期间如有沉淀析出，涡旋混匀后可正常使用。Reagent C有不溶物，不影响使用，保存期间切勿颠倒混匀。

4. 本试剂盒中不包含蛋白酶抑制剂，为防止样品制备过程中的蛋白降解，建议在获得的蛋

白溶液中加入蛋白酶抑制剂。

5. 如需进行蛋白定量，建议使用Bradford方法。

6. 本提取试剂中的提取试剂具有一定的刺激性，一旦接触请立即用水冲洗。

7. 为了您的安全和健康，操作过程中请穿实验服并戴一次性手套。

快速指南

操作步骤

1. 称取样品，加入Reagent A进行匀浆，。

注意：1）样品如有明显块状物，建议研磨后提取。

2）Reagent A为悬浊液，使用前颠倒混匀或吹打均匀后正常使用。

3）推荐按照样品 : Reagent A = 1 : 3（每1 g样品/ 3 mL Reagent A）。

2. 加入等体积的Reagent B，涡旋混匀。

注意：1）Reagent B有分层，使用前切勿扰动。若误将其扰动，请4℃放置30 min待其分层后使用。

2）吸取Reagent B时，注意吸取下层溶液。

3. 4℃或冰上孵育30 min。

4. 4℃，15,000 g，离心15 min。

5. 吸取上清至新的离心管中，加入等体积Reagent A，涡旋充分混匀。

6. 4℃，15,000 g，离心15 min。

7. 重复第6-7步操作一次。

8. 吸取上清至新的离心管中，加入5倍体积的Reagent C，-20℃静置至少2 h以上或过夜。

注意：此步避免吸取到沉淀，若吸取到沉淀，可再次离心后取上清。

9. 4℃，15,000 g，离心15 min，弃上清，收集沉淀。

注意：根据样品的类型的不同，离心后沉淀的贴壁效果不同。若样品离心后的沉淀贴壁不牢固，有部分沉淀溶解在溶液中时，请用移液器将上清吸走并尽量吸干液体。

10. 沉淀中加入1 mL预冷甲醇，用枪头轻轻吹打，重悬沉淀。

11. 4℃，15,000 g，离心5 min，弃上清，收集沉淀。

12. 沉淀中加入2 mL预冷丙酮，用枪头轻轻吹打，重悬沉淀。

13. 4℃，12,000 rpm，离心5 min，弃上清。

注意：1）若样品离心后的沉淀贴壁不牢固，有部分沉淀溶解在溶液中时，请用移液器将上清吸走并尽量吸干液体。

2）若沉淀量过少，可置于-20℃静置30 min再离心收集沉淀。

14. 重复上述第13-14步操作一次。

15. 将沉淀物置于室温条件下自然风干，加入适量Reagent D，4℃静置过夜或者22℃恒温孵育2 h。

注意：为防止蛋白降解，获得较优的实验结果，建议加入适量的蛋白酶抑制剂。

16. 20℃，15,000 g，离心15 min。

17. 收集到的上清即为蛋白溶液样品，可进行下一步分析，或分装保存于-80℃存备用。