服务简介

蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰,约有一半以上的蛋白质可发生糖基化。糖基化对蛋白质的结构和功能有着重要影响,例如影响蛋白质的折叠、运输、定位;参与免疫系统调控的所有关键分子都是糖蛋白;蛋白糖基化程度及糖链结构的异常变化是癌症和其它疾病发生的标志等等。弄清糖基化修饰发生发展的规律是理解蛋白质复杂多样的生物功能的一个重要前提。

蛋白质糖基化的研究有助于从基因组-蛋白组-糖组,这样一个宏观的综合的水平观察分析生命现象,从而达到对生命现象更本质的认识。

服务内容

蛋白质N-link糖基化位点检测

原理

目前蛋白质糖基化研究的重点和难点主要集中于糖蛋白/糖肽的分离富集和糖蛋白的鉴定/糖基化位点的确定2个方面。一般发生N-糖基化位点修饰的蛋白,都有基本的氨基酸结构骨架,为N-X-S/T(X是除了P之外的氨基酸)。为了鉴定N-糖基化修饰位点,首先用蛋白酶酶解蛋白,再通过凝集素富集N-糖基化修饰肽段,最后用糖苷酶PNGase F在18O水中切除链接在Asn上的糖链,糖链释放过程中糖基化位点处的Asn转变为Asp,产生+2.9890Da的分子量差异,该分子量的变化可通过质谱的鉴定而得以发现,从而确定该蛋白质的糖基化位点。

n-glycoproteomics

应用领域

蛋白质折叠、免疫反应、疾病标志物筛选、疾病控制机制、药物作用靶点研究

实验路线

实验仪器

Q-Exactive, Q-Exactive HF, Orbitrap Fusion, Orbitrap Fusion Lumos

送样要求

样品类型送样要求
常规动物组织80mg
坚硬动物组织600mg
动物毛发80mg
常规植物组织1g
木本植物的树根、树皮、树枝等20g
果实种子2g
花粉300mg
微生物50mg
动物细胞1×10^8
血清、血浆0.5ml
乳汁5ml
脑脊液、关节液和淋巴液0.2ml
唾液0.5ml
泪液1ml
尿液100mll
分泌蛋白40ml
* 注意:
1.膜蛋白项目,针对哺乳动物的细胞或组织,邦菲生物采用的是Thermo公司的试剂盒提取。细胞量至少5×106
2.细胞样品的收集方法,邦菲生物推荐使用胰酶消化的方法收集,如果客户对用细胞刮的方法很有经验,注意需在细胞裂解液保护的条件下刮细胞。
3.动物组织样品,务必注意漂洗干净,尤其是血。
4.细胞样品注意漂洗干净,尤其血清培养基培养的细胞,白蛋白残留会影响鉴定结果。
5.细胞样品常规情况下,客户收集好细胞样品送样即可。如果客户收细胞时要加入裂解液,请务必提前与邦菲销售或者技术沟通。

参考文献

[1] Zielinska D F, Gnad F, Wiśniewski J R, et al. Precision mapping of an in vivo N-glycoproteome reveals rigid topological and sequence constraints. Cell, 2010, 141(5): 897-907.

[2] Zielinska D F, Gnad F, Schropp K, et al. Mapping N-glycosylation sites across seven evolutionarily distant species reveals a divergent substrate proteome despite a common core machinery. Molecular cell, 2012, 46(4): 542-548.

[3] Zhao X, Ma C, Han H, et al. Comparison and optimization of strategies for a more profound profiling of the sialylated N-glycoproteomics in human plasma using metal oxide enrichment. Analytical and bioanalytical chemistry, 2013, 405(16): 5519-5529.

[4] Cao Q, Ma C, Bai H, et al. Multivalent hydrazide-functionalized magnetic nanoparticles for glycopeptide enrichment and identification. Analyst, 2014, 139(3): 603-609.

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蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰,约有一半以上的蛋白质可发生糖基化。糖基化对蛋白质的结构和功能有着重要影响,例如影响蛋白质的折叠、运输、定位;参与免疫系统调控的所有关键分子都是糖蛋白;蛋白糖基化程度及糖链结构的异常变化是癌症和其它疾病发生的标志等等。弄清糖基化修饰发生发展的规律是理解蛋白质复杂多样的生物功能的一个重要前提。

蛋白质糖基化的研究有助于从基因组-蛋白组-糖组,这样一个宏观的综合的水平观察分析生命现象,从而达到对生命现象更本质的认识。

服务内容

蛋白质N-link糖基化位点检测

原理

目前蛋白质糖基化研究的重点和难点主要集中于糖蛋白/糖肽的分离富集和糖蛋白的鉴定/糖基化位点的确定2个方面。一般发生N-糖基化位点修饰的蛋白,都有基本的氨基酸结构骨架,为N-X-S/T(X是除了P之外的氨基酸)。为了鉴定N-糖基化修饰位点,首先用蛋白酶酶解蛋白,再通过凝集素富集N-糖基化修饰肽段,最后用糖苷酶PNGase F在18O水中切除链接在Asn上的糖链,糖链释放过程中糖基化位点处的Asn转变为Asp,产生+2.9890Da的分子量差异,该分子量的变化可通过质谱的鉴定而得以发现,从而确定该蛋白质的糖基化位点。

n-glycoproteomics

应用领域

蛋白质折叠、免疫反应、疾病标志物筛选、疾病控制机制、药物作用靶点研究

+ 技术参数

实验路线

实验仪器

Q-Exactive, Q-Exactive HF, Orbitrap Fusion, Orbitrap Fusion Lumos

送样要求

样品类型送样要求
常规动物组织80mg
坚硬动物组织600mg
动物毛发80mg
常规植物组织1g
木本植物的树根、树皮、树枝等20g
果实种子2g
花粉300mg
微生物50mg
动物细胞1×10^8
血清、血浆0.5ml
乳汁5ml
脑脊液、关节液和淋巴液0.2ml
唾液0.5ml
泪液1ml
尿液100mll
分泌蛋白40ml
* 注意:
1.膜蛋白项目,针对哺乳动物的细胞或组织,邦菲生物采用的是Thermo公司的试剂盒提取。细胞量至少5×106
2.细胞样品的收集方法,邦菲生物推荐使用胰酶消化的方法收集,如果客户对用细胞刮的方法很有经验,注意需在细胞裂解液保护的条件下刮细胞。
3.动物组织样品,务必注意漂洗干净,尤其是血。
4.细胞样品注意漂洗干净,尤其血清培养基培养的细胞,白蛋白残留会影响鉴定结果。
5.细胞样品常规情况下,客户收集好细胞样品送样即可。如果客户收细胞时要加入裂解液,请务必提前与邦菲销售或者技术沟通。
+ 文献及案例

参考文献

[1] Zielinska D F, Gnad F, Wiśniewski J R, et al. Precision mapping of an in vivo N-glycoproteome reveals rigid topological and sequence constraints. Cell, 2010, 141(5): 897-907.

[2] Zielinska D F, Gnad F, Schropp K, et al. Mapping N-glycosylation sites across seven evolutionarily distant species reveals a divergent substrate proteome despite a common core machinery. Molecular cell, 2012, 46(4): 542-548.

[3] Zhao X, Ma C, Han H, et al. Comparison and optimization of strategies for a more profound profiling of the sialylated N-glycoproteomics in human plasma using metal oxide enrichment. Analytical and bioanalytical chemistry, 2013, 405(16): 5519-5529.

[4] Cao Q, Ma C, Bai H, et al. Multivalent hydrazide-functionalized magnetic nanoparticles for glycopeptide enrichment and identification. Analyst, 2014, 139(3): 603-609.

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