服务简介

iTRAQ (isobaric tags for relative and absolute quantitation)技术是由美国应用生物系统公司ABI研发的一种多肽体外标记技术。该技术采用4种或8种同位素的标签,通过特异性标记多肽的氨基基团,而后进行串联质谱分析,可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量或绝对含量。

原理

iTRAQ试剂由三部分组成:报告基团(4标:114-117;8标:113-119和121)、质量平衡基团和肽反应标记试剂基团,形成4种或8种相对分子质量均等量(145或305)的异位标签。

itraq4-plex

iTRAQ试剂是可与氨基酸末端氨基及赖氨酸侧链氨基连接的胺标记同重元素。在质谱图中,任何一种iTRAQ试剂标记不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比。 在串联质谱中,信号离子表现为不同质荷比(113-119,121)的峰,因此根据波峰的高度及面积,可以鉴定出蛋白质和分析出同一蛋白质不同处理的定量信息。

itraq

应用领域

疾病标志物筛选、疾病控制机制、药物作用靶点研究、发育机制研究、产量提高、作用机制研究、植物抗逆、营养吸收机制研究、稀有物种研究、特殊功能蛋白质筛选

技术优势

  1. 可同时对2-8种不同条件样品进行蛋白质差异分析
  2. 分离能力强、分析范围广,定性分析结果可靠;
  3. MS具备高灵敏度、检测限低;
  4. 自动化程度高、分析时间快,分离效果好;
  5. 适合广泛样品类型:胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等;
  6. 与凝胶分离的蛋白质定量技术相比,iTRAQ质谱定量技术可检测到更多类型的蛋白质分子,如低丰度蛋白质、强酸(碱)性蛋白质、<10KD或>100KD的蛋白质分子。

实验路线

itraq-process

实验仪器

Q-Exactive, Q-Exactive HF, Orbitrap Fusion, Orbitrap Fusion Lumos

送样要求

样品类型送样要求
常规动物组织30mg
坚硬动物组织200mg
动物毛发20mg
常规植物组织200mg
木本植物的树根、树皮、树枝等5g
果实种子0.5g
花粉150mg
微生物200mg
动物细胞1×10^7
血清、血浆0.2ml
乳汁2ml
脑脊液、关节液和淋巴液0.5ml
唾液0.1ml
泪液300μl
尿液15ml
分泌蛋白10ml
* 注意:
1.膜蛋白项目,针对哺乳动物的细胞或组织,邦菲生物采用的是Thermo公司的试剂盒提取。细胞量至少5×106
2.细胞样品的收集方法,邦菲生物推荐使用胰酶消化的方法收集,如果客户对用细胞刮的方法很有经验,注意需在细胞裂解液保护的条件下刮细胞。
3.动物组织样品,务必注意漂洗干净,尤其是血。
4.细胞样品注意漂洗干净,尤其血清培养基培养的细胞,白蛋白残留会影响鉴定结果。
5.细胞样品常规情况下,客户收集好细胞样品送样即可。如果客户收细胞时要加入裂解液,请务必提前与邦菲销售或者技术沟通。

结果报告展示

初级结果

primary-analysis-results

高级结果

advanced-analysis-results

参考文献

[1] Wypijewski KJ, Tinti M, Chen W, et al. Identification of caveolar resident proteins in ventricular myocytes using a quantitative proteomic approach: dynamic changes in caveolar composition following adrenoceptor activation. Mol Cell Proteomics 2015 14(3): 596-608.

[2] Keshishian H, Burgess MW, Gillette MA, et al. Multiplexed, Quantitative Workflow for Sensitive Biomarker Discovery in Plasma Yields Novel Candidates for Early Myocardial Injury. Mol Cell Proteomics. 2015 14(9): 2375–2393.

[3] Wang J, Zhang J, Zhang CJ, et al. In situ Proteomic Profiling of Curcumin Targets in HCT116 Colon Cancer Cell Line. Sci Rep 2016 6:22146 doi: 10.1038/srep22146.

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iTRAQ (isobaric tags for relative and absolute quantitation)技术是由美国应用生物系统公司ABI研发的一种多肽体外标记技术。该技术采用4种或8种同位素的标签,通过特异性标记多肽的氨基基团,而后进行串联质谱分析,可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量或绝对含量。

原理

iTRAQ试剂由三部分组成:报告基团(4标:114-117;8标:113-119和121)、质量平衡基团和肽反应标记试剂基团,形成4种或8种相对分子质量均等量(145或305)的异位标签。

itraq4-plex

iTRAQ试剂是可与氨基酸末端氨基及赖氨酸侧链氨基连接的胺标记同重元素。在质谱图中,任何一种iTRAQ试剂标记不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比。 在串联质谱中,信号离子表现为不同质荷比(113-119,121)的峰,因此根据波峰的高度及面积,可以鉴定出蛋白质和分析出同一蛋白质不同处理的定量信息。

itraq

应用领域

疾病标志物筛选、疾病控制机制、药物作用靶点研究、发育机制研究、产量提高、作用机制研究、植物抗逆、营养吸收机制研究、稀有物种研究、特殊功能蛋白质筛选

技术优势

  1. 可同时对2-8种不同条件样品进行蛋白质差异分析
  2. 分离能力强、分析范围广,定性分析结果可靠;
  3. MS具备高灵敏度、检测限低;
  4. 自动化程度高、分析时间快,分离效果好;
  5. 适合广泛样品类型:胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等;
  6. 与凝胶分离的蛋白质定量技术相比,iTRAQ质谱定量技术可检测到更多类型的蛋白质分子,如低丰度蛋白质、强酸(碱)性蛋白质、<10KD或>100KD的蛋白质分子。
+ 技术参数

实验路线

itraq-process

实验仪器

Q-Exactive, Q-Exactive HF, Orbitrap Fusion, Orbitrap Fusion Lumos

送样要求

样品类型送样要求
常规动物组织30mg
坚硬动物组织200mg
动物毛发20mg
常规植物组织200mg
木本植物的树根、树皮、树枝等5g
果实种子0.5g
花粉150mg
微生物200mg
动物细胞1×10^7
血清、血浆0.2ml
乳汁2ml
脑脊液、关节液和淋巴液0.5ml
唾液0.1ml
泪液300μl
尿液15ml
分泌蛋白10ml
* 注意:
1.膜蛋白项目,针对哺乳动物的细胞或组织,邦菲生物采用的是Thermo公司的试剂盒提取。细胞量至少5×106
2.细胞样品的收集方法,邦菲生物推荐使用胰酶消化的方法收集,如果客户对用细胞刮的方法很有经验,注意需在细胞裂解液保护的条件下刮细胞。
3.动物组织样品,务必注意漂洗干净,尤其是血。
4.细胞样品注意漂洗干净,尤其血清培养基培养的细胞,白蛋白残留会影响鉴定结果。
5.细胞样品常规情况下,客户收集好细胞样品送样即可。如果客户收细胞时要加入裂解液,请务必提前与邦菲销售或者技术沟通。

结果报告展示

初级结果

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高级结果

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+ 文献及案例

参考文献

[1] Wypijewski KJ, Tinti M, Chen W, et al. Identification of caveolar resident proteins in ventricular myocytes using a quantitative proteomic approach: dynamic changes in caveolar composition following adrenoceptor activation. Mol Cell Proteomics 2015 14(3): 596-608.

[2] Keshishian H, Burgess MW, Gillette MA, et al. Multiplexed, Quantitative Workflow for Sensitive Biomarker Discovery in Plasma Yields Novel Candidates for Early Myocardial Injury. Mol Cell Proteomics. 2015 14(9): 2375–2393.

[3] Wang J, Zhang J, Zhang CJ, et al. In situ Proteomic Profiling of Curcumin Targets in HCT116 Colon Cancer Cell Line. Sci Rep 2016 6:22146 doi: 10.1038/srep22146.

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